Аллергия и ее значение в диагностике инфекционных болезней животных
Аллергические пробы — биологические реакции для диагностики ряда заболеваний, основанные на повышенной чувствительности организма, вызванной аллергеном.
При многих инфекционных заболеваниях за счет активации клеточного иммунитета развивается повышенная чувствительность организма к возбудителям и продуктам их жизнедеятельности. На этом основаны аллергические пробы, используемые для диагностики бактериальных, вирусных, протозойных инфекций, микозов и гельминтозов. Аллергические пробы обладают специфичностью, но нередко они бывают положительными у переболевших и привитых.
Все аллергические пробы подразделяют на две группы — пробы in vivo и in vitro.
К первой группе {in vivo)относятся кожные пробы, осуществляемые непосредственно на пациенте и выявляющие аллергию немедленного (через 20 мин) и замедленного (через 24 — 48 ч) типов.
Аллергические пробы in vitroоснованы на выявлении сенсибилизации вне организма больного. Их применяют тогда, когда по тем или иным причинам нельзя произвести кожные пробы, либо в тех случаях, когда кожные реакции дают неясные результаты.
Для проведения аллергических проб используют аллергены — диагностические препараты, предназначенные для выявления специфической сенсибилизации организма. Инфекционные аллергены, используемые в диагностике инфекционных заболеваний, представляют собой очищенные фильтраты бульонных культур, реже взвеси убитых микроорганизмов или АГ, выделенные из них.
Кожные пробы.Инфекционные аллергены вводят, как правило, внутрикожно или накожно, путем втирания в скарифицированные участки кожи. При внутрикожном способе в среднюю треть передней поверхности предплечья специальной тонкой иглой вводят 0,1 мл аллергена. Через 28 — 48 ч оценивают результаты реакции ГЗТ, определяя на месте введения размеры папулы.
Неинфекционные аллергены (пыльца растений, бытовая пыль, пищевые продукты, лекарственные и химические препараты) вводят в кожу уколом (прик-тест), накожно путем скарификации и втирания или внутрикожной инъекцией разведенного раствора аллергена. В качестве отрицательного контроля используют ИХН, в качестве положительного — раствор гистамина. Результаты учитывают в течение 20 мин (ГНТ) по величине папулы (иногда до 20 мм в диаметре), наличию отека и зуда. Внутрикожные пробы ставят в случае отрицательного или сомнительного результата прик-теста. По сравнению с последним, дозу аллергена уменьшают в 100-5000 раз.
Кожные пробы на наличие ГЗТ широко применяют для выявления инфицированности людей микобактериями туберкулеза (проба Манту), возбудителями бруцеллеза (проба Бюрне), лепры (реакция Митсуды), туляремии, сапа, актиномикоза, дерматомикозов, токсоплазмоза, некоторых гельминтозов и др.
Пробы in vitro. Эти методы исследования безопасны для больного, достаточно чувствительны, позволяют количественно оценить уровень аллергизации организма.
В настоящее время разработаны тесты для определения сенсибилизации, основанные на реакциях Т- и B-лимфоцитов, тканевых базофилов, выявлении общих специфических IgE в сыворотке крови и др. К ним относятся реакции торможения миграции лейкоцитов и бласттрансформации лимфоцитов, специфическое розеткообразование, базофильный тест Шелли, реакция дегрануляции тканевых базофилов, а также аллергосорбентные методы (определение специфических IgE в сыворотке крови).
Реакция торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ).РТМЛ основана на подавлении миграции моноцитов и других лейкоцитов под действием медиаторов, вырабатываемых сенсибилизированными лимфоцитами, в присутствии специфического аллергена.
Реакция бласттрансформации лимфоцитов (РБТ).В основе этой реакции лежит способность нормальных лимфоцитов периферической крови вступать в митоз и превращаться в бластные формы при культивировании их in vitro под действием специфических факторов — аллергенов и неспецифических стимуляторов митогенеза — митогенов (фитогемагглютинин, конканавалин А, липополисахариды и другие вещества).
Реакция специфического розеткообразования.Розетки — характерные образования, возникающие in vitro в результате прилипания эритроцитов к поверхности иммунокомпетентных клеток. Розеткообразование может происходить спонтанно, поскольку Т-лимфоциты человека содержат рецепторы к эритроцитам барана. Спонтанное розеткообразование здоровых людей составляет 52 — 53% и служит показателем функционального состояния Т-лимфоцитов. Этот феномен воспроизводится также и в том случае, если используют эритроциты, на которых фиксированы соответствующие аллергены.
Реакция дегрануляции тканевых базофилов.Методика основана на том, что под действием аллергена происходит дегрануляция тканевых базофилов крысы, предварительно сенсибилизированных цитофильными AT из сыворотки крови больного.
Базофильный тест Шелли.Известно, что базофильные гранулоциты человека или кролика также дегранулируются в присутствии сыворотки больного и аллергена, к которому чувствителен данный пациент.
Определение антител класса IgE in vitro. Лабораторная диагностика заболеваний, в основе которых лежит ГНТ, основана на определении аллергенспецифических IgEанти-IgE. При использовании радиоактивной метки метод носит название радиоаллергосорбентного теста (PACT), но чаще в качестве метки используют фермент или флюоресцирующее вещество (ФАСТ). Время анализа — 6 — 7 часов. Принцип метода: фиксированный на твердой основе известный аллерген инкубируют с сывороткой крови больного; находящиеся в сыворотке специфические IgEанти-IgE связываются с аллергеном и, таким образом, остаются фиксированными на основе и могут вступать в специфическое взаимодействие с добавляемыми мечеными анти-IgE.
Источник
Непременным условием возникновения аллергических р-ций явл-ся наличие аллергена, в ответ на который в орг-ме образуются антитела. Во многих случаях аллергенными св-вами обладают продукты превращения и особенно окисления лекарственных пр-тов. В мех-ме развития аллергии различают 3 последовательные стадии: 1) иммунологическая – происходит соединение аллергена с антителом в жидких тканевых средах; р-ция строго специфичная; 2) патохимическая – происходит повреждение клеток под воздействием иммунного комплекса аллерген-антитело и нарушение активности ферментных систем на мембране и внутри клеток. Наибольшее значение имеют тучные клетки рыхлой соединительной ткани, клетки эндотелия кровеносных сосудов, нервные и гладкомышечные. Под воздействием иммунного комплекса в тканях происходит бурное высвобождение БАВ типа медиаторов – гистамина, гепарина, серотонина, брадикинина и т.д. 3) патофизиологическая – происходит нарушение специфических ф-ций органов и систем в рез-те воздействия на них освободившихся БАВ или прямого воздействия на орг-м комплекса антиген-антитело. Значение: 1) диагностика инфекционных заболеваний с помощью кожно-аллергических проб; 2) осложнение при лечении инфекционных заб-ний.
2.• Мероприятия в отношении источника инфекции:
своевременное выявление больных и носителей патогенных микроорганизмов;
обеспечение ранней диагностики заболеваний;
учёт больных и носителей;
изоляция источника;
лечение в поликлинических условиях;
долечивание после выписки из стационара;
санация носителей и больных хроническими формами заболеваний;
проведение бактериологического контроля за полнотой освобождения от возбудителей;
проведение гигиенического воспитания больных и носителей;
обеспечение диспансерного наблюдения за переболевшими, больными хронической формой инфекционного заболевания и хроническими носителями.
• Мероприятия, направленные на прерывание путей передачи (совместно с территориальным центром санитарно-эпидемиологического надзора):текущая и заключительная дезинфекция в очаге;
обор проб из объектов внешней среды для лабораторного исследования;запрещение использования продуктов, воды, одежды и других предметов, предполагаемых в качестве факторов передачи возбудителя.
• Мероприятия, проводимые в отношении лиц, находившихся в контакте с источником инфекции:
активное выявление этих лиц;их изоляция;медицинское наблюдение;лабораторное обследование;
санитарно-просветительная работа;специфическая и неспецифическая профилактика.
Существенное значение в борьбе и профилактике инфекционных болезней имеют кабинет инфекционных заболеваний (структурное подразделение поликлиники) и кабинет (отделение) профилактики инфекционных заболеваний, организуемый в составе детской городской поликлиники или центральной районной больницы. Основные задачи этих подразделений — обеспечение своевременного и полного выявления инфекционных больных, проведение диспансерного наблюдения за реконвалесцентами, участие в планировании, организации, контроле за „ проведением (а иногда и в самом проведении) профилактической иммунизации населения. Иными словами, кабинеты инфекционных заболеваний, организованные в целях повышения качества диагностики и лечения инфекционных болезней, диспансерного наблюдения за реконвалесцентами, служат повседневными консультативными центрами для участковых врачей. Возглавляет кабинет врач-инфекционист, прошедший хорошую эпидемиологическую подготовку и квалифицированно пользующийся методом эпидемиологической диагностики, способный руководить профилактической и противоэпидемической работой участковых врачей. Под его руководством в поликлинике проводят конференции с анализом врачебных ошибок, разборы историй болезни пациентов с разными инфекциями, обсуждение динамики инфекционной заболеваемости на участке. Кабинет инфекционных заболеваний не только контролирует деятельность по раннему выявлению и диагностике больных, но и организует работу по повышению квалификации участковых врачей по вопросам диагностики, лечения и специфической профилактики инфекционных болезней. Большой раздел работы кабинетов составляет систематическое изучение инфекционной заболеваемости как на отдельных врачебных участках, так и на всей территории, обслуживаемой поликлиникой. Врач инфекционного кабинета каждый месяц составляет отчёт о движении инфекционной заболеваемости и представляет его в территориальный центр санитарно-эпидемиологического надзора по специальной форме №85-леч. Сведения о проводимой в поликлиниках профилактической работе, включая и отчёт о профилактических прививках, представляют ежеквартально
Источник
При подозрении на инфекционную болезнь в хозяйстве основная задача врача-эпизоотолога — своевременно установить диагноз, используя комплексный метод диагностики.
Иммунологический:
Аллергическая проба (внутрикож-ная, глазная, подкожная) серологический (РА, РГА, РНГА, РТГА, РТНГА, ККРА, ККРНГА, РСК, РДСК, РИФ, РЗГАд, РНГАд, РП, РДП, РН, ‘ РИД, РБП, РИА, . ИФА, РФ, РИЭОФ, КР с молоком, РБП)
Комплексный метод диагностики инфекционных болезней
Эпизоотологический Клинический
Патоморфологический:
Патологоанатомический гистологический
Бактериологический:
Микроскопия (световая, люминесцентная)
Выделение возбудителя
Биопроба
Вирусологический:
Микроскопия (люминесцентная, световая, электронная)
Выделение вируса биопроба
Гематологический
Примечание. Для каждой болезни существует перечень показателей, по которым диагноз считают установленным.
Благодаря правильному и своевременному диагнозу удается обеспечить эффективность оздоровительных мероприятий, т. е. быстро купировать возникший эпизоотический очаг и предупредить дальнейшее распространение болезни.
Эпизоотологический метод. Представляет собой систему изучения проявлений эпизоотического процесса. Для характеристики последнего необходимо собрать точную информацию о восприимчивых видах, источнике и резервуаре возбудителя болезни, механизме его передачи, воротах инфекции, интенсивности проявления эпизоотического процесса, сезонности, предрасполагающих факторах, заболеваемости, смертности, летальности. Кроме того, особое внимание обращают на факторы, определяющие пути дальнейшего распространения заболевания — выполнение противоэпизоотических мероприятий и условия внешней среды.
Чтобы охарактеризовать эпизоотическое состояние хозяйства, сопоставляют и оценивают обобщенные эпизоотологические показатели, получаемые путем статистической обработки данных первичного учета заболеваний и профилактических мероприятий.
Клинический метод. При клиническом исследовании животных, подозреваемых в заболевании инфекционной болезнью, необходимо всегда строго соблюдать правила работы, предусмотренные соответствующей инструкцией.
Клиническое исследование рекомендуют начинать с измерения температуры тела животного. Далее осматривают животное в нефиксированном состоянии: обращают внимание на положение тела реакцию на различные раздражители, прием корма и воды, характер фекалий, особенности дефекации и мочеиспускания. Затем приступают к исследованию отдельных систем и органов по схеме, общепринятой в клинической диагностике болезней.
Клинические признаки инфекционной болезни зависят от многих факторов: вида и локализации возбудителя, течения, формы проявления и стадии болезни, резистентности организма и других причин. Во всех случаях клинические признаки одной и той же инфекционной болезни у животных даже одного вида сильно варьируют.
Патоморфологический метод. Включает в себя патологоанатомический и гистологический методы исследований. Патологоанатомический метод считают важным, но не всегда окончательным методом диагностики. Например, если при вскрытии трупа животного (птицы) отмечают характерные изменения — туберкулы, то сразу же диагностируют туберкулез, при обнаружении в селезенке свиньи краевых геморрагических инфарктов — чуму, кровоизлияний на границе мышечного и железистого желудка у кур — болезнь Ньюкасла и т. д.
Порядок патологоанатомического исследования: оценивают состояние трупа, кожи и слизистых оболочек, затем исследуют лимфатическую систему, серозные покровы, мышцы и суставы, органы дыхания, сердце и кровеносные сосуды, печень, селезенку, почки, глотку, пищевод, желудок, тонкий кишечник, толстый кишечник, мочевой пузырь, органы воспроизводства, головной и спинной мозг.
Однако во многих случаях наряду с патологоанатомическим применяют и метод лабораторных исследований (гистологических, бактериологических и др.). С помощью гистологического метода устанавливают точный диагноз при таких болезнях, как — бешенство (тельца Бабеша—Негри), ринопневмония (внутриядерные включения типа Коудри), оспа (тельца-включения).
Бактериологический метод. Это ценный метод диагностики инфекционных болезней. Для бактериологического исследования от больных или павших животных необходимо правильно взять патологический материал и грамотно оформить сопроводительный документ. Поступивший биоматериал обрабатывают в зависимости от предполагаемой болезни, делают мазки-отпечатки, красят их соответствующими методами, выделяют чистую культуру посевом на питательные (элективные) среды, заражают чувствительных лабораторных животных биоматериалом или выделенной чистой культурой (табл.1).
1. Бактериологический метод диагностики некоторых инфекционных болезней
На основании обнаружения патогенных микроорганизмов в поступившем материале устанавливают этиологический диагноз.
Вирусологический метод. Для вирусологического исследования в лабораторию направляют патологический материал от больных животных, взятый в период проявления у них клинических признаков (температурная реакция, угнетение, воспалительные процессы в верхних дыхательных путях, сопровождающиеся серозными или слизистыми истечениями из носовой полости, диарея, образование везикул, афт, иногда аборты), или вынужденно убитых (павших) животных, взятый не позднее чем через 2 ч после их гибели. Вирусологический метод диагностики включает в себя: обнаружение возбудителя в патологическом материале различными методами (электронная, люминесцентная или световая микроскопия, заражение культуры клеток, лабораторных животных и т. д.), выделение и идентификацию вируса в различных серологических реакциях, биопробу.
Гематологический метод. В лабораторию для гематологического исследования отправляют кровь, которую берут с соблюдением правил асептики из яремной вены в пробирки с антикоагулянтом— 10 %-м раствором трилона Б, гепарина, цитрата натрия из расчета 0,02 мл раствора на 1 мл крови.
Гематологический метод используют как вспомогательный, а при некоторых инфекционных болезнях (лейкоз крупного рогатого скота, инфекционная анемия лошадей) — в качестве основного метода диагностики. При лейкозе крупного рогатого скота диагноз основан на обнаружении в периферической крови повышения содержания лейкоцитов основного лимфоидного ряда в 1-10-3 мл крови, а при инфекционной анемии лошадей — на основании снижения содержания эритроцитов в 1 • 103 мл крови, гемоглобина и замедленной скорости оседания эритроцитов (СОЭ).
Иммунологический метод. Включает в себя серологическую диагностику — в лаборатории исследуют сыворотки крови для обнаружения антител и аллергическую пробу, с помощью которой в хозяйствах выявляют животных, больных туберкулезом, паратуберкулезом, бруцеллезом, сапом, реже — сибирской язвой, листериозом, туляремией.
Источник
Установить наличие аллергической реакции нетрудно, значительно труднее выявить характер аллергена или группу аллергенов, вызвавших заболевание у конкретного животного. Для этого проводят сбор анамнеза, клиническое обследование и наблюдение, ставят кожные тесты, используют специальные лабораторные исследования.
Сбор анамнеза. При сборе анамнеза выясняют, какие новые виды корма потребляло животное перед появлением признаков аллергии, были ли возможны укусы насекомыми, змеями, проводились ли прививки, какие использовались лекарственные средства. Собирают данные о первых и последующих признаках аллергической реакции, поведении животного, общих и местных признаках: кожный зуд, высыпания, тошнота, рвота, понос, болевой синдром, одышка и т. д. Обращают внимание на качество кормов, возможное поражение плесенью. При подозрении на кормовую аллергию проводят анамнестический анализ кормления животного в течение длительного времени. При этом узнают, чем кормили собаку (кошку), какой конкретно продукт потребляла: мясо (говядина, свинина, баранина, конина, кроличье, куриное, утиное, гусиное и др.), молоко (коровье, козье и др.), сыр (пошехонский, голландский, российский, чеддер и др.), рыба (треска, хек, окунь, камбала и др.), яйца, кондитерские изделия (шоколад, печенье и др.), овощи, фрукты. Узнают, какой фирмы использовали сухие корма, менялись ли они в последнее время, как на них реагировало животное. Владелец животного поможет врачу прийти к какому-то выводу о причине пищевой и иной аллергии.
Клиническое обследование и наблюдение. Клиническое обследование больного животного проводят по общепринятой схеме. При этом особое внимание обращают на состояние слизистых оболочек, кожного покрова, подкожной клетчатки, работу сердца, органов дыхания, функцию печени, почек и других органов. При исследовании слизистых оболочек, кожи и подкожной клетчатки обращают внимание на возможный их отек, зуд кожи, появление на ней сыпи, волдырей, экзематозных участков, свойственных аллергической реакции. Исследованием сердца и органов дыхания устанавливают признаки миокардита, эндокардита, отека легких, гортани, которые нередко сопровождают аллергические реакции.
Кожные тесты. В медицине разработаны различные методы кожного тестирования. Для кожного тестирования используют стандартные серийные аллергены, изготовляемые из пыльцы растений, домашней пыли, шерсти, пуха, эпидермиса кожи животных и птиц, пищевых продуктов и другого сырья. Кожные тесты применяют для диагностики только IgE-зависимых аллергических заболеваний. Принцип постановки кожных тестов основан на том, что внесенный в (на) кожу причинно-значимый аллерген вступает во взаимодействие с антиген-презентирующими клетками (макрофагами) и Т-лимфоцитами. Результатом такого взаимодействия при наличии сенсибилизации является высвобождение медиаторов аллергии и развитие местной аллергической реакции различной интенсивности.
К методам лабораторной специфической диагностики аллергий относят: метод иммуноферментного анализа (ИФА) для выявления специфических IgE, радиоаллергический тест (PACT) для выявления специфических IgE, прямой базофильный тест (реакция специфического высвобождения гистамина из базофилов периферической крови больного). Возможности проведения такой лабораторной диагностики в ветеринарии весьма ограничены. Из лабораторных показателей в какой-то мере имеет клиническое значение определение в крови содержания лейкоцитов с их дифференциацией. Лейкопения, эозинофилия нередко указывают на развитие аллергической реакции, возможными аллергенами которых являются вирусы или гельминты.
Источник