Иммунный статус у детей с аллергией
07 апреля 2015г.
Введение: Рост аллергических заболеваний (АЗ) отмечается в последние десятилетия во всех странах мира. Изучение распространенности АЗ представляет собой не только медицинскую, но и социальную проблему, так как степень нарушения качества жизни, обусловленная ими, влияет на способность к обучению, выбор будущей профессии. Экстремальные климато-географические условия Крайнего Севера оказывают влияние на иммунологические механизмы формирования аллергических заболеваний. В основе аллергических заболеваний (АЗ) у детей лежат состояния, характеризующиеся нарушением нормального функционирования одного или нескольких звеньев иммунитета. Вопрос эффективной иммунокоррекции у детей с АЗ привлекает внимание клиницистов, но остается до конца неразрешенным [1,2,3,4].
Цель исследования: Исследование состояния иммунной и цитокиновой систем у детей с АЗ, проживающих в разных регионах Республики Саха (Якутия).
Материалы и методы исследования: Обследовано 1200 детей с АЗ в возрасте от 7 до 14 лет, а также 2000 здоровых детей — контрольная группа. Нормативы разработаны коллективом Иммунологической лаборатории Диагностического центра Минздрава РС (Я) совместно с Институтом здоровья РС (Я) (в Табл.1 представлен возраст детей от 7 до 14 лет).
Все исследования проводились в период низких температур (зимнее время года).
Определение субпопуляций Т- и В-лимфоцитов производилось методом ИФА с помощью моноклональных антител.
Определение иммуноглобулинов проводилось турбодиметрическим методом путем измерения скорости светорассеяния при образовании иммунных комплексов при кинетическом измерении на мультискане.
Уровень IL-1, IL-13, FNO, IFN в сыворотке определяли с помощью метода ИФА, согласно инструкции прилагаемой к наборам антител. Наборы для определения интерлейкинов иммуноферментным методом наборами реагентов «Pro Con IL-1», «Pro Con IF gamma» (ООО «Протеиновый контур» Санкт-Петербург). Принципы твердофазного ИФА основан на том, что фермент пероксидаза хрена, ковалентно присоединенный к антителам, при условии сохранения биологической активности (способность взаимодействовать с субстратом, связываясь при этом с иммобилизованным иммунным комплексом, образующимся на «сенсибилизированных» лунках, в которых инкубируют исследуемые образцы и стандартные реагенты.
Статистические расчеты выполнены на базе прикладных программ «SAS» и «SPSS» При анализе таблиц сопряженности (оценки корреляции признаком и оценкой значимости различий между группами) использовали критерий 2 (Пирсона и отношения правдоподобия) и точный тест Фишера. Сравнения средних величин проводили однофакторным дисперсионным анализом с помощью Т-критерия Стьюдента для оценки равенства средних F-критерия Фишера для оценки равенства дисперсии. Связь между параметрами оценивали с помощью коэффициентов линейной и ранговой корреляции. Для оценки относительного риска каждого из показателей факторов риска и их отдаленных градаций, а также для отбора наиболее значимых комбинаций факторов риска использовали логистическую регрессию (унивариантный анализ для каждого из рассматриваемых признаков отдельно и множественный пошаговый метод для совокупности признака).
Результаты исследования: Группа больных детей с аллергическими заболеваниями была разделена на группы городских и сельских школьников.
При анализе изменений иммунного статуса у городских школьников с аллергическими выявлено наибольшее снижение показателей Т-клеточного звена и компонентов комплемента у городских жителей, снижение В-клеточного отмечено у сельских подростков. Средние показатели содержания компонентов комплемента С3 и С4 в Якутии ниже, чем по России. У городских жителей повышен уровень ЦИК и IgE, IL-13 и снижено содержание IFN-γ, FNO-ά . У сельских подростков отмечается снижение IFN-γ .
Подобные изменения: повышение уровня ЦИК, IL-13, IgE и снижение СD8+ и IFN-γ свидетельствуют о большем риске формирования АЗ в городских условиях. Далее, нами проведен анализ иммунного статуса у детей, проживающих в разных регионах РС(Я).
У детей с АЗ Северных улусов отмечается наибольшее снижение показателей Т- и В-клеточного звена, а также преимущественно содержания сывороточного иммуноглобулина А. Снижение показателей Т-клеточного звена отмечаются у детей с аллергопатологией, проживавших в промышленных поселках Северного, Центрального регионов, преимущественно субпопуляции Т-супрессоров и NK-клеток (СD8+и СD16+). Наиболее низкий уровень показателей отмечен в Центральных, Вилюйских и Северных улусах (табл. 2).
Содержание ЦИК в сыворотке крови у обследованных детей с АЗ выше нормы во всех регионах РС (Я), содержание общего иммуноглобулина Е выше у детей, проживавших в г. Якутске и Северных улусах. Снижение субпопуляции СD8+ у жителей Северных улусов влияет на продукцию IgE, а снижение содержания СD16+ влияет на противовирусный ответ.
Сниженные показатели содержания FNO-ά и IFN-γ отмечаются у детей с АЗ поселков Крайнего Севера. Содержание IL-13 выше у детей, проживавших в условиях Крайнего Севера, что является фактором риска формирования аллергических заболеваний.
Уровень ЦИК, IgE, IL-13 и снижение IFN-γ в сыворотке крови выше у детей, проживавших в населенных пунктах Северных улусов. Данные закономерности свидетельствуют об активации субпопуляции Т-хелперов 2, продукции иммуноглобулина Е. При сопоставлении эпидемиологии аллергических заболеваний и особенностей иммунного статуса каждого региона выявлена взаимосвязь между высоким содержанием IL-13, девиации Th1/Th2 ответа и частоты аллергических заболеваний у детей.
В результате полученных данных были сделаны следующие вывод: в длительный период низких температур у детей (больных АЗ и здоровых) отмечается снижение показателей Т-клеточного иммунитета (преимущественно СD16+ и СD8+), снижение концентрации IFN-γ, повышение IL-13, свидетельствует о риске формирования аллергопатологии.
Выводы:
1. У детей с аллергической патологией снижены показатели клеточного иммунитета (СД3+, СД4+, СД8+, СД16+, СД 22+).
2. У детей с аллергической патологией, проживающих в северных улусах РС(Я) отмечено снижение уровня содержания цитокинов (IFN-γ, FNO-ά), что свидетельствует о девиации иммунного ответа и риске формирования аллергических заболеваний.
Список литературы
1. Балаболкин И.И. Дермо-респираторный синдром у детей// Детский доктор.-2000.-№2.-С.24-26. 43. Бикбулатова А.Н.
2. Вирусиндуцированные заболевания органов дыхания/Нигматуллина Г.Н., Еникеева Е.Г//Тез. докл. 13-го Национального конгресса по болезням органов дыхания. — СПб., — 2003. — 106с.
3. Вогралик М.В. Вторичные иммунодефицитные состояния. Иммунные заболевания системы крови / М.В. Вогралик, Л.В. Ковальчук // Учебно-методическое пособие. — Горький, ГМИ им. С.М. Кирова, — 2000.- С.25-67.
4. Маркова Т.П. Практическое пособие по клинической иммунологии и аллергологии. -М. -2003.-С.31-45.
Источник
Иммунологическое обследование для детей – специально подобранный обширный комплекс определяемых показателей, позволяющий оценить важные параметры иммунной системы у детей любого возраста. Анализ позволяет определить состояние и напряженность противовирусного иммунитета, оценить наличие и выраженность аутоиммунного, атопического компонентов в течении различных заболеваний. Исследование предназначено для возрастной группы 1-16 лет.
С помощью детской иммунограммы можно понять, в каком состоянии находятся защитные силы организма ребенка. Иногда иммунограмма может быть ключевым анализом, объясняющим причину безуспешного лечения некоторых болезней, например, если ребенок часто болеет и выздоровление проходит долго, несмотря на все принимаемые меры. При скрытой инфекции у ребенка иммунограмма покажет, какие «пробелы» имеются в иммунной системе. Отклонения показателей анализа от нормы укажут на неэффективность работы иммунной системы, а интерпретация врача поможет понять, как и почему нарушен иммунитет. Кроме того, существенные отклонения в иммунограмме могут свидетельствовать о серьезном иммунодефиците, который способен привести к развитию хронических инфекций и воспалениям органов и тканей в организме ребенка.
Иммунитет человека после рождения формируется постепенно, с течением времени, поэтому иммунограмма взрослого и ребенка будет отличаться. В данном специально разработанном комплексе при анализе иммунограммы учитываются особенности детского организма, оцениваются все звенья иммунитета, не только количество клеток, но и их функциональная активность.
* Результаты исследования выдаются с заключением врача – аллерголога-иммунолога, доктора медицинских наук.
Состав комплекса
- Состояние клеточного звена иммунитета — определение содержания основных субпопуляций лимфоцитов, а также углубленный анализ малых популяций В-клеток и расширенный анализ NK-клеток (Natural killers – «натуральные киллеры»)
- Определение уровня основных классов иммуноглобулинов в сыворотке крови (IgA, IgE, IgG, IgM)
- Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК)
- С3, С4 компоненты комплемента
- Лейкоцитарная формула
Синонимы русские
Иммунограмма, иммунный статус ребенка, детский иммунный статус, иммунофенотипирование, клеточный иммунитет, многоцветный клеточный анализ методом проточной цитометрии.
Синонимы английские
Human Immune System, Immunophenotyping, Multicolor Flow Cytometry Cell Analysis, Human Leukocyte Differentiation Antigens.
Метод исследования
Проточная цитометрия (для клеточного звена), иммуноферментный анализ – ИФА (для ЦИК), турбидиметрия (для иммуноглобулинов).
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Венозную кровь.
Как подготовиться к исследованию?
- Исключить из рациона алкоголь в течение 24 часов до исследования.
- Детям в возрасте до 1 года не принимать пищу в течение 30-40 минут до исследования.
- Детям в возрасте от 1 до 5 лет не принимать пищу в течение 2-3 часов до исследования.
- Не принимать пищу в течение 12 часов до исследования, можно пить чистую негазированную воду.
- Полностью исключить (по согласованию с врачом) прием лекарственных препаратов в течение 24 часов перед исследованием.
- Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение в течение 24 часов до исследования.
- Не курить в течение 30 минут до исследования.
Общая информация об исследовании
В современном понимании иммунный статус человека – это совокупность лабораторных показателей, характеризующих количественную и функциональную активность клеток иммунной системы на данный момент. Оценка иммунного статуса проводится с помощью иммунологического лабораторного обследования – иммунограммы. Иммунограмма крови не отражает избирательно состояние патологически измененного органа или системы, но позволяет оценить иммунную систему в целом (суммарный эффект изменения активности иммунной системы в ответ на чужеродный антиген).
Оценка клеточного состава (иммунофенотипирование) лимфоцитов крови человека – основной компонент в оценке иммунного статуса – выполняется методом проточной цитофлуориметрии.
Иммунофенотипирование – характеристика клеток при помощи моноклональных антител или каких-либо других зондов, позволяющих судить об их типе и функциональном состоянии по наличию того или иного набора клеточных маркеров.
Иммунофенотипирование лейкоцитов заключается в обнаружении на их поверхности маркеров дифференциации, или CD-антигенов. Лейкоциты экспрессируют ряд поверхностных и цитоплазматических антигенов, уникальных для своей субпопуляции и стадии развития. CD-антигены (англ. cluster of differentiation antigens) – это антигены на поверхности клеток, маркеры, отличающие одни типы клеток от других. Дифференциации этих антигенов изучены и стандартизованы, им присвоены определенные номера. CD могут быть распознаны с помощью соответствующих моноклональных антител. Используя флуоресцентно-меченные моноклональные антитела, связывающиеся с определенными CD, можно с помощью метода проточной цитометрии подсчитать содержание лимфоцитов, относящихся к различным по функции или стадии развития субпопуляциям.
В основе проточной цитофлуориметрии лежит проведение фотометрических и флуоресцентных измерений отдельных клеток, пересекающих одна за другой вместе с потоком жидкости луч монохроматического света, обычно света лазера.
Метод позволяет не только определить количественное соотношение основных популяций лимфоцитов:
- Т-лимфоциты (CD3+CD19-),
- Т-хелперы/индукторы (CD3+CD4+CD45+),
- Т-цитотоксические лимфоциты (Т-ЦТЛ) (CD3+CD8+CD45+),
- истинные «натуральные киллеры» (NK-клетки) (CD3-CD56+CD45+),
- В-лимфоциты (CD19+CD3-),
– но и оценить малые клеточные популяции, а также изучить их функциональную активность:
- Т-лимфоциты, экспрессирующие маркеры NK-клеток (Т-NK-клетки) (CD3+CD56+CD45+),
- NK-клетки, экспрессирующие альфа-цепь антигена CD8 (CD3-СD8+CD45+),
- NK-клетки цитолитические (CD3-CD16+(orhigh) CD56dimCD45+),
- NK-клетки цитокинпродуцирующие (CD3-CD16-(orlow) CD56brightCD45+),
- истинные «натуральные киллеры» (NK-клетки) (CD3-CD16+CD45+),
- В-1-клетки (CD19+CD5+CD27-CD45+), связанные продукцией аутоантител,
- активированные В-лимфоциты (CD3-CD25+CD45+),
- В-2-клетки (CD19+CD5-CD27-CD45+),
- В-клетки памяти (CD19+CD5-CD27+CD45+),
- активированные Т-лимфоциты (CD3+HLA-DR+CD45+) и активированные цитотоксические лимфоциты (CD8+HLA-DR+CD45+),
- В-лимфоциты и активированные NK-клетки (CD3-HLA-DR+CD45+),
- активированные Т-лимфоциты, экспрессирующие альфа-цепь рецептора ИЛ-2 (CD3+CD25+CD45+),
- регуляторные Т-хелперные клетки (CD4+CD25brightCD127negCD45+), выполняющие иммуносупрессорную функцию.
Такое всестороннее изучение клеточного состава лимфоцитов в совокупности с результатами анализа основных классов сывороточных иммуноглобулинов, определением циркулирующих иммунных комплексов, клиническим анализом крови, анализом С3, С4 компонентов комплемента позволяет установить более тонкие механизмы иммунологических нарушений. Они проводятся для уточнения степени и глубины поражения иммунной системы и подбора препарата для проведения последующей адекватной иммунокорректирующей терапии, оценки эффективности проводимого лечения, определения прогноза течения заболевания.
Когда назначается исследование?
Рекомендовано для комплексного обследования пациентов, входящих в группу риска по аутоиммунному иммунопатологическому синдрому. Это пациенты с такими заболеваниями, как:
- ревматоидный артрит;
- рассеянный склероз;
- диффузные заболевания соединительной ткани (системная красная волчанка, склеродермия, дерматомиозит);
- аутоиммунный тиреоидит;
- неспецифический язвенный колит и т. д.
Что означают результаты?
Референсные значения
С3 компонент комплемента: 0.90 — 1.80 г/л
С4 компонент комплемента: 0.10 — 0.40 г/л
Суммарные иммуноглобулины класса A в сыворотке (IgA): 0.20 — 1.00 г/л
Суммарные иммуноглобулины класса G в сыворотке (IgG): 4.53 — 9.16 г/л
Суммарные иммуноглобулины класса M в сыворотке (IgM): 0.19 — 1.46 г/л
Суммарные иммуноглобулины класса E в сыворотке (IgE): 0.00 — 60.00 МЕ/мл
Лейкоцитарная формула: https://helix.ru/kb/item/02-025#subj12
Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК): 0.0 — 120.0 у.е.
Состояние клеточного звена иммунитета
Т-лимфоциты (CD3+CD19-) | 1.40 — 3.60 *10^9/л |
Т-лимфоциты (CD3+CD19-), % | 60 — 80 % |
Т-хелперы/индукторы (CD3+CD4+CD45+) | 0.70 — 2.00 *10^9/л |
Т-хелперы/индукторы (CD3+CD4+CD45+), % | 34 — 50 % |
Т-цитотоксические лимфоциты (Т-ЦТЛ) (CD3+CD8+CD45+) | 0.50 — 1.40 *10^9/л |
Т-цитотоксические лимфоциты (Т-ЦТЛ) (CD3+CD8+CD45+), % | 22 — 37 % |
Незрелые Т-лимфоциты (CD4+CD8+CD45+), % | 0 — 2 % |
Т-лимфоциты, экспрессирующие маркеры NK-клеток (Т-NK-клетки) (CD3+CD56+CD45+) | 0.03 — 0.25 *10^9/л |
Т-лимфоциты, экспрессирующие маркеры NK-клеток (Т-NK-клетки) (CD3+CD56+CD45+), % | 1.7 — 8.6 % |
Индекс CD3+CD4+/CD3+CD8+ (Т-хелперы/ЦТЛ) | 1.2 — 2.9 |
Истинные натуральные киллеры (NK-клетки) (CD3-CD56+CD45+) | 0.10 — 0.70 *10^9/л |
Истинные натуральные киллеры (NK-клетки) (CD3-CD56+CD45+), % | 5 — 23 % |
NK-клетки, экспрессирующие альфа-цепь антигена CD8 (CD3-СD8+CD45+) | 0.06 — 0.28 *10^9/л |
NK-клетки, экспрессирующие альфа-цепь антигена CD8 (CD3-СD8+CD45+), % | 2 — 12 % |
В-лимфоциты (CD19+CD3-) | 0.40 — 1.50 *10^9/л |
В-лимфоциты (CD19+CD3-), % | 21 — 28 % |
Активированные Т-лимфоциты (CD3+HLA-DR+CD45+) | 0.10 — 0.40 *10^9/л |
Активированные Т-лимфоциты (CD3+HLA-DR+CD45+), % | 1.3 — 10% |
В-лимфоциты и активированные NK-клетки (CD3-HLA-DR+CD45+) | 0.04 — 0.50 *10^9/л |
В-лимфоциты и активированные NK-клетки (CD3-HLA-DR+CD45+), % | 5 — 20 % |
Активированные Т-лимфоциты, экспрессирующие альфа-цепь рецептора ИЛ-2 (CD3+CD25+CD45+) | 0.06 — 0.35 *10^9/л |
Активированные Т-лимфоциты, экспрессирующие альфа-цепь рецептора ИЛ-2 (CD3+CD25+CD45+), % | 3.5 — 12.5 % |
Активированные В-лимфоциты (CD3-CD25+CD45+) | 0.04 — 0.06 *10^9/л |
Активированные В-лимфоциты (CD3-CD25+CD45+), % | 1.5 — 2.2 % |
Регуляторные Т-клетки (CD4+CD25brightCD127negCD45+) (% от всех Т-хелперов), % | 1.65 — 5.75 % |
В-1-клетки (CD19+CD5+CD27-CD45+), % | 0.5 — 2.1 % |
В-2-клетки (CD19+CD5-CD27-CD45+), % | 6.5 — 15% |
В-клетки памяти (CD19+CD5-CD27+CD45+), % | 1.8 — 6.8 % |
Истинные натуральные киллеры (NK-клетки) (CD3-СD16+CD45+) | 0.10 — 0.70 *10^9/л |
Истинные натуральные киллеры (NK-клетки) (CD3-СD16+CD45+), % | 5 — 23 % |
NK-клетки цитокин-продуцирующие (CD3-СD16-(or low)CD56brightCD45+) | 0.00 — 0.02 *10^9/л |
NK-клетки цитокин-продуцирующие (CD3-СD16-(or low)CD56brightCD45+), % | 0.2 — 1 % |
NK-клетки цитолитические (CD3-СD16+(or high)CD56dimCD45+) | 0.12 — 0.35 *10^9/л |
NK-клетки цитолитические (CD3-СD16+(or high)CD56dimCD45+), % | 7.8 — 17% |
Изменения различных клеточных популяций лимфоцитов в сторону повышения или понижения развиваются при различных патологических процессах в организме, таких как инфекции, аутоиммунные и онкологические заболевания, иммунодефициты, в постоперационном периоде, при трансплантации органов.
Ниже представлена таблица с клиническими ситуациями, которые могут приводить к изменениям в субпопуляционном составе лимфоцитов.
Субпопуляция лимфоцитов | Повышение показателя | Снижение показателя |
T-лимфоциты (CD3+CD19-) | • Острые и хронические инфекции; • гормональный дисбаланс; • длительный прием лекарственных препаратов (особенно монотерапия); • прием биологически активных добавок; • интенсивные занятия спортом; • беременность; • Т-клеточные лейкозы. | • Некоторые виды инфекций; • иммунодефицитные состояния; • алкогольный цирроз печени; • карцинома печени; • аутоиммунные заболевания; • прием иммуносупрессивных препаратов. |
Т-хелперы (CD3+CD4+CD45+) | • Ряд аутоиммунных заболеваний; • гормональный дисбаланс; • некоторые инфекции; • отдельные Т-клеточные лейкозы; • отравление солями бериллия. | • Иммунодефицитные состояния (основной лабораторный признак вторичного иммунодефицита); • алкогольная болезнь печени; • аутоиммунные заболевания; • прием иммуносупрессивных препаратов или стероидов. |
Т-цитотоксические лимфоциты (CD3+CD8+CD45+) | • Некоторые вирусные инфекции; • ряд Т-клеточных лейкозов; • наркоз; • острая фаза аллергии; • ряд аутоиммунных патологий. | • Некоторые виды аутоиммунных, аллергических заболеваний; • иммуносупрессивная терапия. |
Активированные Т-лимфоциты (CD3+HLA-DR+CD45+) | • Инфекции; • аутоиммунная патология; • аллергия; • онкологические заболевания; • алкогольный цирроз печени; • беременность. | Не имеет диагностического значения. |
В-лимфоциты (CD19+CD3-) | • Ряд аутоиммунных патологий; • стресс; • В-клеточные лимфомы; • длительная экспозиция формальдегидом. | • Гипореактивность, перераспределение в очаги воспаления; • общий вариабельный иммунодефицит; • наследственные иммунодефициты; • внутривенное введение иммуноглобулинов; • алкогольный цирроз печени. |
«Натуральные киллеры» (CD3-CD56+CD45+), (CD3-CD16+CD45+) | • Фаза восстановления после вирусных инфекций (гепатит В, С); • ряд аутоиммунных заболеваний; • онкологические заболевания; • беременность; • алкогольный цирроз печени. | • Ряд инфекций; • ряд аутоиммунных заболеваний; • интенсивное курение; • иммуносупрессивная терапия и терапия стероидами. |
Т-«натуральные киллеры», НК-Т (CD3+CD56+CD45+) | • Длительные хронические воспалительные процессы; • тяжелое течение воспалительных процессов; • длительная персистенция антигена в организме. | Не имеет диагностического значения. |
B-1-клетки (CD19+CD5+CD27-CD45+) | • Аутоиммунная патология (системная красная волчанка, ревматоидный артрит, аутоиммунный тиреоидит, неспецифический язвенный колит, миастения); • аутоиммунные поражения при инфекционных заболеваниях (хламидиоз, синдром Рейтера, бруцеллез и т. д.); • лимфопролиферативные процессы. | Не имеет диагностического значения. |
T-reg. (регуляторные Т-клетки (CD4+CD25brightCD127negCD45+) | • Различные новообразования; • лимфопролиферативные процессы; • инфекционные заболевания. | • Аутоиммунная патология (сахарный диабет 1-го типа, рассеянный склероз, ревматоидный артрит, аутоиммунный тиреоидит, неспецифический язвенный колит, болезнь Крона, миастения); • аллергические заболевания (бронхиальная астма, атопический дерматит, пищевая аллергия). |
В совокупности с клиническими данными, симптоматикой, другими методами лабораторных исследований вышеуказанные изменения являются диагностическим признаком возникновения этих патологических процессов в организме человека.
Важные замечания
- Результаты данного исследования необходимо сопоставлять с клиническими данными и показателями других лабораторных анализов.
- Оценка иммунологического статуса у пациента в динамике существенно повышает клиническую значимость исследования.
Источник
