Иммуноферментный анализ крови при аллергии норма
Иммуноферментный анализ (ИФА) — метод лабораторной диагностики, позволяющий обнаруживать специфические антитела и антигены при самых разных патологиях.
Где можно сдать анализ?
ИФА — один из самых распространенных и точных методов для выявления инфекций, передающихся половым путем, в частности ВИЧ, ВПЧ, гепатита В.
Узнать больше…
Для того чтобы результаты анализов были максимально достоверными, необходимо правильно подготовиться к их сдаче.
Как подготовиться?
Современная диагностика в медицине немыслима без высокочувствительных лабораторных анализов. Прежде для установления причин тех или иных симптомов врачи были вынуждены ориентироваться на косвенные признаки болезни, а также проводить многоступенчатые микроскопические исследования в попытке обнаружить возбудителя инфекции. Сегодня достаточно одного-единственного теста — такого как иммуноферментный анализ — чтобы подтвердить или опровергнуть первоначальный диагноз.
Основные понятия и принцип метода иммуноферментного анализа
Иммуноферментный анализ (ИФА) — это метод лабораторной диагностики, основанный на реакции «антиген-антитело», который позволяет выявить вещества белковой природы (в том числе ферменты, вирусы, фрагменты бактерий и другие компоненты биологических жидкостей).
Чтобы понять, как устроен иммуноферментный анализ, попробуем разобраться в сути реакции «антиген-антитело». Антиген — это чужеродная для организма молекула, как правило, белкового происхождения, которая может попасть в тело человека вместе с инфекционным агентом. Частицы чужой крови (если она не совпадает с нашей по группе) также являются антигенами. В организме антигены способны вызывать иммунную реакцию, направленную на защиту целостности внутренней среды от чужеродных веществ. Поэтому наше тело синтезирует особые вещества — антитела (иммуноглобулины), способные по принципу «ключ к замку» соединяться с антигенами, связывая их в иммунный комплекс (этот процесс как раз называется реакцией «антиген-антитело»). Такие иммунные комплексы легче распознаются и уничтожаются клетками иммунитета.
Существует несколько разновидностей антител, каждая из которых вступает в действие на определенном этапе иммунного ответа. Так, первыми в ответ на проникновение антигена в организм синтезируются иммуноглобулины класса М (IgM). Содержание этих антител наиболее высоко в первые дни инфекционного процесса.
Следом за ними иммунная система выбрасывает в кровь иммуноглобулины класса G (IgG), которые помогают уничтожать антигены до полной победы над инфекцией, а также продолжают циркулировать по сосудам в дальнейшем, обеспечивая иммунитет к повторному заражению. На этом явлении основана вакцинация: благодаря прививкам, содержащим ослабленные антигены микробов и вирусов, в нашей крови появляется большое количество IgG, которые при контакте с реальной угрозой быстро подавляют инфекцию — до того, как она нанесет вред здоровью.
Также существуют иммуноглобулины класса А (они в большом количестве содержатся в слизистых оболочках, защищая «подступы» к организму), Е (борются с паразитарными инфекциями) и другие. В лабораторной диагностике объектами интереса чаще всего являются IgM, IgG и IgA: по их концентрации можно оценить, на какой стадии находится инфекционный процесс, а также узнать, болел ли когда-либо человек тем или иным недугом (например, краснухой или ветряной оспой).
Как узнать, какие именно антигены или антитела присутствуют в организме человека? Когда врач предполагает, что причиной заболевания является определенная инфекция, или желает измерить концентрацию определенного гормона, он назначает пациенту иммуноферментный анализ.
Реакцию «антиген-антитело» можно воспроизвести в лабораторных условиях: использовать уже готовые антитела или антигены, чтобы определить, есть ли в исследуемом образце соответствующее им соединение.
Для начала необходимо получить образец биологической жидкости — обычно, это сыворотка крови. Лаборатория использует пластиковые планшеты с лунками, в которых уже содержатся очищенные антигены предполагаемого возбудителя (или — антитела, в случае если задачей является поиск антигена). Образцы вносятся в лунки, где происходит — или не происходит — образование иммунных комплексов. Если «встреча» состоялась, особое красящее вещество вступает в ферментную реакцию с объединенной молекулой, что позволяет с помощью инструментальной оценки оптической плотности сделать выводе о результатах анализа.
ИФА бывает качественным и количественным. В первом случае подразумевается однозначный ответ: искомое вещество или найдено, или не найдено в образце. В случае с количественным анализом более сложная цепь реакций дает возможность оценить концентрацию антител в крови человека, что в сравнении с результатами предыдущих тестов даст ответ на вопрос о том, как развивается инфекционный процесс.
Это интересно
Предшественником иммуноферментного анализа был радиоиммунный анализ, в котором для идентификации успешной реакции использовались меченые антитела и антигены. Поскольку проведение такой диагностики представляло потенциальную угрозу для здоровья сотрудников лаборатории, ученые озаботились поиском безопасной альтернативы по «окраске» образцов. Так в 1971 году был изобретен ИФА.
Преимущества метода
Бесспорные преимущества ИФА — высокая чувствительность и специфичность метода. Чувствительность — это возможность распознать искомое вещество, даже если его концентрация в образце невысока. Специфичность же подразумевает безошибочность диагностики: если результат положительный, значит, найдены именно те антитело или антиген, которые предполагались, а не какие-то другие.
ИФА во многом заменил «золотой стандарт» микробиологии — бактериологический метод диагностики, в ходе которого для идентификации возбудителя требовалось выделить его из организма, а затем в течение нескольких дней выращивать культуру на питательной среде в пробирке. Все то время, пока производился анализ, врачи были вынуждены лечить пациента «вслепую», догадываясь о происхождении микроорганизма по симптомам болезни. Определение IgM с помощью ИФА позволяет поставить точный диагноз уже в первые дни болезни.
Высокая степень технологичности проведения иммуноферментного анализа минимизирует влияние человеческого фактора, что снижает вероятность ошибки. Большинство используемых в современных лабораториях тест-систем и реактивов для ИФА выпускаются в промышленных условиях, что гарантирует точный результат.
Недостатки метода
К сожалению, для проведения ИФА нужно знать, что именно искать: методика анализа подразумевает, что врач заранее имеет предположение о природе заболевания. Поэтому нет смысла назначать такой тест в надежде случайно «угадать» диагноз.
В случае диагностики инфекционных заболеваний иммуноферментный анализ не может найти возбудителя и определить его специфичные свойства: он лишь указывает на наличие антител в крови у больного, косвенно свидетельствующих о присутствии чужеродного микроорганизма в теле человека.
ИФА — крайне точный, но не дешевый метод, поэтому обращаться к нему нужно с умом, а интерпретацией результатов должен заниматься квалифицированный врач.
Показания к назначению и выявляемые заболевания
Невозможно охватить полный список показаний к проведению ИФА. Вот наиболее распространенные цели анализа:
- Диагностика острых и хронических инфекционных заболеваний:
- IgM и IgG к вирусным гепатитам А, B, C, E, а также антигенов гепатитов В и С;
- IgG к ВИЧ;
- Ig M и IgG к цитомегаловирусной инфекции;
- Ig M и IgG к вирусу Эпштейна-Барр;
- Ig M и IgG к герпетическим инфекциям;
- Ig M и IgG к токсоплазмозу;
- Ig M и IgG к кори, краснухе, сальмонеллезу, дизентерии, клещевому энцефалиту и другим заболеваниям;
- IgG к паразитарным заболеваниям;
- Ig M и IgG к инфекциям, передающимся половым путем;
- IgG к хеликобактерной инфекции.
Анализируемый биоматериал и особенности его забора
Основной биоматериал для проведения ИФА — это сыворотка крови: в лаборатории у пациента берут образец крови из вены, из которого в дальнейшем удаляют форменные элементы, затрудняющие проведение анализа. В некоторых других случаях для анализа используется спинномозговая жидкость, околоплодные воды, мазки слизистых оболочек и т.д.
Для того чтобы избежать искажений в результатах, рекомендуется сдавать кровь натощак, а за две недели до исследования (если целью является диагностика хронических, скрыто протекающих инфекционных заболеваний) необходимо отказаться от приема антибиотиков и противовирусных препаратов.
Сроки готовности результатов ИФА
При наличии необходимых реактивов и хорошей организации работы лаборатории результат анализа вы получите в течение 1–2 суток после забора крови. В некоторых случаях, при необходимости получения экстренного ответа, этот срок может быть сокращен до 2–3 часов.
Расшифровка иммуноферментного анализа
Результатом качественного ИФА будет однозначный вердикт: искомое вещество либо найдено, либо не найдено в образце. Если же речь о количественном анализе, то концентрация может выражаться числовым значением или определенным количеством знаков «+» (от одного до нескольких).
Анализируемые показатели
- IgM — наличие этого класса иммуноглобулинов говорит об остром инфекционном процессе в организме. Отсутствие IgM может говорить как об отсутствии конкретного возбудителя в организме, так и о переходе инфекции в хроническую стадию.
- IgA при отрицательном результате теста на IgM чаще всего свидетельствует о хронической или скрыто протекающей инфекции.
- IgM и IgA (совместное присутствие) — два положительных результата говорят о разгаре острой фазы заболевания.
- IgG говорит либо о хронизации заболевания либо о выздоровлении и выработке иммунитета к инфекционному агенту.
Возможные результаты ИФА
В зависимости от содержания анализа в бланке могут быть представлены данные в виде таблицы с перечислением всех антител или антигенов с пометками об отрицательной или положительной реакции, либо будет указано количественное значение результата (отрицательный, слабоположительный, положительный или резко положительный). Последний вариант определяет, сколько антител содержится в анализируемом образце.
Еще один количественный показатель — индекс авидности антител, выраженный в процентах. Он указывает, сколько времени прошло от начала инфекционного процесса (чем выше индекс — тем больше).
Сегодня выпускаются тысячи видов тест-систем ИФА, позволяющих обнаруживать специфические антитела и антигены при самых разных патологиях. Поэтому этот анализ используется практически во всех медицинских отраслях. Диагноз, поставленный с помощью ИФА, — это гарантия назначения адекватной терапии и эффективного лечения заболевания.
Источник
Всегда ли при аллергии нужны анализы?
Диагностика реакций индивидуальной чувствительности включает несколько базовых методов:
- Сбор анамнеза (получение информации о заболевании путем опроса пациента).
- Объективный осмотр.
- Лабораторные тесты.
- Кожные и провокационные пробы.
Все перечисленные способы диагностики дополняют друг друга и используются в сочетании, поэтапно.
Лабораторные анализы позволяют идентифицировать причинно-значимые аллергены, поэтому их рекомендуют проводить каждому пациенту.
От них не стоит отказываться даже тогда, когда диагноз можно установить уже на основании клинической картины (например, при острой крапивнице): без выявления веществ, провоцирующих аллергические реакции, невозможно планировать терапию.
Классификация
Понятие «анализ на аллергию» объединяет множество лабораторных тестов, которые делятся как:
- общеклинические (в ходе исследования выполняется оценка параметров, отражающих состояние всего организма в целом и не позволяющих привязать изменение нормы результатов исключительно к аллергической патологии – причиной может быть анемия или инфекция, а также любой другой процесс, влияющий на функциональные системы);
- специфические (предназначены для целенаправленного поиска изменений, свидетельствующих о наличии индивидуальной иммунной чувствительности; анализы этой группы служат только для диагностики аллергических заболеваний).
Материалом для исследования может быть:
- Кровь.
- Моча.
- Кал.
- Назальная слизь.
- Отделяемое из глаз.
- Мокрота.
Биологический материал должен быть свежим, его забирают после предварительной подготовки, требования к которой зависят от варианта теста. Взятие крови и других сред может выполняться как в лаборатории, так и в процедурном кабинете медицинского учреждения.
Общеклинические тесты
Используются, как правило, на начальном этапе обследования и нужны для поиска косвенных признаков, свидетельствующих о наличии индивидуальной чувствительности. Результаты, полученные с их помощью, не могут быть основанием для установления диагноза аллергии, однако полезны для обнаружения лабораторных симптомов инфекции или иной патологии, от которой необходимо отличать иммунную непереносимость. Кроме того, тесты этой группы применяются для оценки состояния наиболее важных функциональных систем и всего организма в целом.
Общий анализ крови при аллергии
Включает исследование таких показателей как:
- гемоглобин;
- эритроциты;
- цветной показатель;
- лейкоциты;
- гематокрит.
Для выполнения теста используется капиллярная или венозная кровь. При аллергии наиболее значимы изменения, касающиеся одного из видов лейкоцитов – клеток под названием «эозинофилы». Они принимают участие в реализации реакций гиперчувствительности, и их количество при этом резко возрастает. Однако такой признак, хотя и считается одним из базовых диагностических критериев аллергии, все же носит косвенный характер. Эозинофилия (этот термин принято использовать в научных источниках) может быть обусловлена также наличием иных патологических состояний:
- Гельминтоз.
- Опухоль.
- Иммунодефицит.
- Ревматоидный артрит.
- Лимфогранулематоз.
При аллергии значимо увеличение эозинофилов в крови более 5%.
Следует также обращать внимание на уровень еще одного подвида лейкоцитов – базофилов. Они появляются в крови в большом количестве при чувствительности к чужеродному белку (антигену), попавшему в организм.
Исследование мазка из полости носа (риноцитограмма)
Материалом служит назальная слизь, нанесенная с помощью тампона или ватной палочки на предметное стекло; метод диагностики – микроскопия. Анализ широко применяется при воспалительном процессе в полости носа и позволяет дифференцировать, в первую очередь, инфекцию от аллергии при рините (насморке). Оцениваются такие показатели как:
- нейтрофилы;
- лимфоциты;
- эозинофилы;
- эритроциты.
На результаты может влиять применение интраназальных лекарственных препаратов (сосудосуживающих капель или спреев, содержащих глюкокортикостероиды, а также масляных составов), поэтому за 12 часов до исследования необходимо отказаться от их применения. Значимо нарастание уровня эозинофилов более 10%. Однако даже при нормальном содержании этих клеток нельзя отвергать диагноз индивидуальной чувствительности, если есть яркие клинические симптомы.
Анализ мокроты
Врач-аллерголог назначает этот тест, как правило, при подозрении на наличие у пациента бронхиальной астмы. Мокроту нужно собирать после полоскания рта и интенсивного кашля, избегать попадания в материал, предназначенный для отправки в лабораторию, слюны. Забор производится утром в чистую сухую посуду, которая плотно закрывается. Оцениваются вначале макроскопические характеристики:
- Цвет.
- Прозрачность.
- Запах.
- Количество.
- Характер выделений (слизистый, с примесью гноя, кровянистый и др.).
Исследуется нативный (свежий) образец и материал, фиксированный и окрашенный на стекле. Лаборант, который выполняет анализ, осуществляет поиск клеточных элементов – это:
-
нейтрофилы; - лимфоциты;
- эозинофилы;
- эритроциты;
- моноциты;
- цилиндрический эпителий;
- альвеолярные макрофаги;
- эластические волокна.
При аллергии увеличивается количество эозинофилов. Кроме того, для астмы типичны спирали Куршмана (беловатые извитые тяжи) и кристаллы Шарко-Лейдена (объемные образования из мелких бронхов).
Специфические исследования
Материалом служит преимущественно кровь. Однако если общеклинические тесты могут при необходимости быть выполнены в каждой лаборатории, группа специфических исследований не всегда доступна при поликлиниках. Сдать анализы на аллергию можно в крупных центрах или частных медицинских учреждениях:
- Инвитро.
- Гемотест.
- Синево.
- СИТИЛАБ и др.
Стоимость исследований колеблется в широком диапазоне – в среднем, от 600 до 2000 рублей за базовый пакет: определение общего иммуноглобулина E (IgE) и специфических комплексов этого класса, иллюстрирующих чувствительность к отдельным антигенам (например, арахису, пыльце березы, латексу и др.). Существует большое количество тестов, предлагающихся пациентам; рассмотрим наиболее популярные из них.
Иммуноферментный анализ крови на аллергию
Сокращенно звучит как «ИФА»; считается «золотым стандартом» современной лабораторной диагностики заболеваний, связанных с иммунными реакциями. Анализ предназначен для выявления антител – специфических белков, циркулирующих в крови и выполняющих защитную функцию. Иначе они называются иммуноглобулинами; при аллергии исследуются отдельные классы – IgE, IgG, способные взаимодействовать с антигенами и создавать комплексы.
Материал для исследования – сыворотка крови пациента. Она наносится на специальную поверхность (чаще всего это планшет с ячейками), где готовится реакционная смесь; по изменению окраски, фиксируемому прибором-фотометром, судят о наличии либо отсутствии иммунных комплексов. Количество антител определяют с помощью фермента, являющегося специальной «меткой».
Тест Шелли
В основе метода лежит фиксация изменений состояния базофилов после добавления к образцу биологического материала испытуемого вещества. Если оно действительно является аллергеном, произойдет выброс содержимого гранул клеток, и они станут «истощенными», что хорошо видно при визуальной оценке под микроскопом.Существует две модификации исследования:
- прямой тест (используется кровь пациента и вещество, рассматриваемое как аллерген; биологический материал должен быть свежим, его смешивают с провокатором и специальным фиксирующим раствором, затем фильтруют полученную смесь через целлюлозную мембрану);
- непрямой тест (дополнительно используются клетки кролика).
Анализ оценивается как положительный (слабо, умеренно, резко) или отрицательный; для получения результата нужно посчитать дегранулированные базофилы под микроскопом и определить, каков процент «истощенных» клеток.
Иммуноблот
Это один из наиболее чувствительных методов, позволяющих обнаружить антитела и подтвердить наличие индивидуальной непереносимости. С его помощью можно разрешить сомнения, возникающие при использовании иных, менее специфичных тестов.
В основе лежит иммуноферментный анализ крови на аллергию, проводимый на специальных нитроцеллюлозных мембранах. Они снабжены полосами, содержащими белки; после контакта с сывороткой, взятой у пациента, запускается реакция, и в случае положительного результата участок, где располагается причинно-значимый аллерген, окрашивается. Показатели сравниваются с контролем, после чего фиксируются аналитические данные.
Обнаружение антител к исследуемым веществам означает лишь факт наличия сенсибилизации, но еще не формирует окончательный диагноз.
Если в крови пациента выявлены специфические иммуноглобулины, это свидетельствует, в первую очередь, о свершившемся иммунном ответе – то есть формировании сенсибилизации, чувствительности к конкретному антигену. Нередко бывает так, что анализы показывают непереносимость пера птиц, но пациент продолжает чихать и жалуется на насморк даже после отсутствия любого контакта с этим провокатором. В таком случае нужно задумываться об ином триггере, который не был учтен при первичном обследовании (например, домашней пыли или пищевом продукте).
Расшифровка результатов
Проводится при сравнении данных, полученных из лаборатории, со стандартными нормами значений; наиболее важные показатели можно описать в таблице:
| Метод | Норма | Патология (признак наличия аллергии) |
|---|---|---|
| Общий анализ крови, уровень эозинофилов | До 5% | Более 5% |
| Риноцитограмма, эозинофилы | До 10% | Более 10% |
| Исследование мокроты | Единичные эозинофилы | Много эозинофилов, наличие спиралей Куршмана, кристаллов Шарко-Лейдена, «стекловидный» характер и вязкая консистенция отделяемого |
| ИФА (общий IgE, кЕ/л) | От 20 до 100 | Больше 100 |
| ИФА (специфический IgE, kU/L) | Менее 0,35 или класс 0 | От 0,35 до 0,69 – неоднозначно; от 0,70 до 3,49 – слабо позитивный результат; от 3,50 до 100 (или класс 3–6) – положительный результат |
| Иммуноблот | ||
| Тест Шелли | Нет дегрануляции | Более 70% базофилов утратили целостность гранул – резко положительный результат |
Следует помнить, что повышение общего IgE на сегодняшний день не считается достоверным маркером наличия аллергии и может быть связано с гельминтозами, острыми инфекциями и другими патологиями. В то же самое время нормальный уровень в сыворотке крови не говорит об отсутствии сенсибилизации. Поэтому стоит ориентироваться на специфические антитела класса IgE, так как нарастание их концентрации более показательно.
Подготовка к обследованию
Чтобы результаты анализов были достоверными, нужно следовать нескольким основным правилам:
- По возможности сдавать биологический материал в утренние часы – с 7 до 11.
- Предупреждать врача о приеме лекарственных средств.
- Не посещать перед анализами процедуры физиотерапии, рентгенкабинет.
- Есть за 8–12 часов до сдачи крови, приходить в лабораторию или процедурный кабинет натощак (воду пить можно).
Сутки до взятия материала из вены нужно придерживаться диеты – исключить блюда, содержащие жир, отказаться от алкоголя.
Следует также избегать интенсивных физических нагрузок и стрессов. Если планируется соскоб из полости носа, запрещено пользоваться каплями и спреями за 12 часов до анализа. Перед сдачей на исследование мокроты нужно прополоскать рот.
Автор: Татьяна Торсунова
Источники: medscape.com, mdlinx.com,
health.harvard.edu.
Как и где можно сдать пробу на заболевание.
Каким образом проводится и как определяется аллерген.
Анализы на аллергены: современные методы выявления.
Источник
