Методы диагностики аллергии по иммунологии

Задачами диагностики аллергического заболевания являются:

• Установление природы заболевания (аллергическое или неаллергиче­ское). Нередко это можно установить на основании харак­терных жалоб больного и клинической картины заболевания ( напр. при поллинозе, сывороточной болезни). Однако иногда возникают значительные трудности (напр, при необычных реакциях на прием лекарственных препаратов, пищевых продуктов и др.);
• Необходимо дифференцировать является ли данное аллергическое заболевание является истинно аллергическим или псевдоаллергическим, то есть необ­ходимо определить степень участия иммунных и неим­мунных механизмов в развитии данного заболевания;
• Важно выяснить причину данного заболевания. Знание причины вместе с установлением истинной ал­лергической природы процесса дает основание для дальнейшего адекватного курса лечения, назначении специфической гипосенсибилизации.

АЛЛЕРГОЛОГИЧЕСКИЯ АНАМНЕЗ.

Под руководством акаде­мика АМН СССР А. Д. Адо была разработана схема истории болезни, где подробно сформулированы вопросы аллергологического анамнеза. Основные задачи анамнеза:

• Установить есть ли наследственная предрасположенность к аллергологическим заболеваниям;
• Выявить связь между факторами окружающей среды и развити­ем заболевания;
• Определить те группы аллергенов или единичные аллергены, которые могли бы вызвать возникновение аллергии.

Во время расспроса выясняют, какие аллергические заболевания были в прошлом или имеются в настоящее время в семье больного, как реагирует больной на введение сывороток, вакцин, прием лекарств; отмечена ли сезонность заболевания, его связь с простудой; где и когда возникают обострения, каковы жилищные и рабочие условия.

Например, для больных с аллергией на домашнюю пыль характерен «эффект элиминации» — улучшение со­стояния при выездах из дома.
При аллергии к некоторым производственным аллергенам характерен «эффект по­недельника» — ухудшение состояния на работе после вы­ходных дней. Связь с простудными заболеваниями выявляется обычно у больных с инфекционно-аллергической формой бронхиальной астмы, ринита. Для боль­ных поллинозом характерна выраженная сезонность за­болевания — обострение его во время цветения расте­ний, пыльца которых является аллергеном. Наслед­ственная предрасположенность выявляется у больных с реагиновым типом аллергических реакций.

Таким образом, уже расспрос больного позволяет определить возможные аллергены и предположить тип аллергической реакции. Эти предположения должны быть подтверждены специфическими методами обследо­вания — кожными, провокационными и другими тестами.
 

КОЖНЫЕ ПРОБЫ ПРИ АЛЛЕРГИИ.
 

Через кожу вводят аллерген для выявления спе­цифической сенсибилизации организма и оценки величины и характера развившегося при этом отека или воспалительной реак­ции. Кожные пробы (КП) ставят, как правило, в периоде ремиссии.

Различают: качественные и количественные, прямые и пассивные кожные пробы.

• Качественные пробы отвечают на вопрос: есть сен­сибилизация к данному аллергену или нет? Положи­тельная проба еще не считается доказательством того, что данный аллерген является причиной этого заболева­ния. Причиной может оказаться другой аллерген, с которым КП не ставилась.Сенсибилизация к аллергену не всегда закан­чивается развитием аллергической реакции. Поэтому у людей, практически здоровых, можно выявить существо­вание сенсибилизации к определенным аллергенам (до­машняя пыль, стрептококк и др.) без признаков развития аллер­гической реакции.
  Аллерген можно считать причиной заболевания при совпа­дении положительных результатов пробы и данными анамнеза. При от­сутствии такого совпадения или недостаточной выра­женности КП ставят провокационные тесты.
• Количественные пробы дают представление о степени сенсибилизации. Они ставятся для выявления индиви­дуальной чувствительности и решения вопроса о началь­ных дозах аллергена при проведении специфической гипосенсибилизации.
• При Прямых КП аллерген вводят исследуемому боль­ному. При Пассивных или непрямых КП сыворотку крови больного вводят внутрикожно здоровому лицу, а затем в места введения сыворотки вводят аллерген (реакция Прауснитца — Кюстнера).

Время появления кожной реакции после воздействия аллергена и ее характер зависят от типа аллерги­ческой реакции. При реагиновом типе (I тип) реакция появляет­ся в первые 10—20 мин. Она представляет собой волдырь округлой или неправильной формы с псевдо­подиями. Цвет волдыря розоватый либо бледный с зоной артериальной гиперемии вокруг. Эта реакция получила название реакции волдырного, уртикарного или немедленного типа.
При аллер­гических процессах иммунокомплексного и замедленного типов (III и IV типов) кожная реакция представляет собой острое воспаление со всеми его признаками — краснотой, припухлостью, повышением температуры в зоне воспаления и болезненностью. Раз­ница между III и IV типом заключается во времени развития и интенсивности воспаления. При III типе воспаление более выражено, оно появляется через 4—6 ч и проходит через 12—24 ч. При IV типе воспаление достигает максимального развития через 24—48 ч. Та­ким образом, с помощью КП можно определить тип аллергической реакции на данный аллерген.

Скарификационные КП.
При этом типе КП на кожу предплечья наносят в виде капель различные аллергены на расстоянии 2—2,5 см и через каждую каплю отдельным для каждого аллергена скарифи­катором либо концом иглы производят повреждение эпидермиса таким образом, чтобы не повредить кровеносных сосудов. Вариантом этого вида КП является проба уколом (prick-тест) — прокалывание инъекци­онной иглой только эпидермиса. Скарификационные КП применяют в случаях, когда предполагают наличие реагинового типа аллергической реакции (при поллинозах, атопической форме бронхиальной астмы или ринита, отеке Квинке, крапивнице). Они выявляют только реагиновый тип аллергии. Их оценку производят через 15—20 мин.

Внутрикожные пробы.
При этом типе КП аллерген вводится внутрикожно. Эти пробы более чувствительны, чем скарификационные, но и менее специфичны. При их постановке возможны осложнения в виде органных и общих аллергических реакций. Применяются для выявления сенсибилизации к аллергенам бактериального и грибкового происхождения, а также для определения степени чувствительности к аллергенам неинфекционной природы. Аллергены перепончатокрылых насекомых часто не дают положительных скарификационных проб, по­этому их также вводят внутрикожно, а реакция выявляется в виде системных проявлений. Тест с этими аллергенами можно отнести к провокационным тестам.

Реакция Прауснитца — Кюстнера — реакция пассивной сенсибили­зации кожи.
Ее применяли для диагностики реагинового типа аллерги­ческих реакций, например при лекарственной, пищевой аллергии и др., а также для изучения свойств реагинов и определения их титра. Принцип реакции заключается во внутрикожном введении здоровому реципиенту сыворотки крови от больного и последующем введении в эти места исследуемых аллергенов. При наличии в сыворотке крови соответствующих антител у реципиента в местах ее введения разви­вается кожная реакция немедленного типа. В настоящее время этой реакцией пользуются редко в связи с опасностью переноса с сывороткой крови скрытой инфекции (вирус гепатита и др.), а также появлением лабораторных методов определения реагинов.

Интенсивность КП оценивают либо плюсами (от 0 до четырех плю­сов), либо по диаметру папулы или воспалительного очага. Учитывая возможность развития серьезных осложнений вплоть до анафилактиче­ского шока при несоблюдении техники постановки КП, а также слож­ность интерпретации полученных результатов, проведение КП возможно только в аллергологических кабинетах специально обученным персона­лом под наблюдением врача-аллерголога.
 

Провокационные тесты (ПТ) — способ этиологической диагностики аллергических реакций, основанный на воспроизведении этой реакции введением аллергена в шоковый орган. По виду шокового органа (т. е. того органа, поражение которого является веду­щим в картине заболевания) выделяют следующие виды ПТ.

Конъюнктивальный ПТ применяют для выявления аллергенов, вызы­вающих развитие аллергического конъюнктивита или поллииоза, проте­кающего с явлениями конъюнктивита. Проводят с осторожностью из-за опасения вызвать резкую воспалительную реакцию. Аллерген закапы­вают в нижний конъюнктивальный мешок в концентрации, которая дала слабоположительную КП. При положительной реакции появляют­ся слезотечение, гиперемия конъюнктивы, зуд век.

Назальный ПТ применяют при аллергических ринитах. Является наиболее безопасным. Аллерген в той же дозе, что и для конъюнкти-вального ПТ, закапывают в одну половину носа. При положительной реакции появляются чиханье, зуд в носу, ринорея, затруднение дыха­ния через данную половину носа. Риноскопически определяется набу­хание слизистой оболочки раковин, сужение носового прохода.

Ингаляционный ПТ обычно применяют при бронхиальной астме. Исследование проводят в фазе ремиссии в условиях стационара. Последнее связано с тем, что возможно развитие тяжелого приступа астмы сразу или позднее (через 4—24 ч), поэтому за больным необхо­димо наблюдение. Перед постановкой ПТ записывают на спирографе характер кривой форсированной ЖЕЛ (ФЖЕЛ) и вычисляют ее вели­чину за первую секунду — ФЖЭЛ; вычисляют также коэффициент Тиффно, являющийся отношением ФЖЕЛ,; к ЖЕЛ в процентах. У здоровых людей он составляет 70—80%. Затем исследуемый вдыхает через ингалятор сначала контрольный раствор и при отсутствии реак­ции на него — растворы аллергена последовательно, начиная с мини­мальных концентраций до той, которая даст заметную реакцию. Каж­дый раз записывают спирограммы. Тест считается положительным при снижении ФЖЕЛ! и коэффициента Тиффно более чем на 20%. Раз­вившийся бронхоспазм купируют бронходилататорами. При одновре­менном определении максимальной объемной скорости выдоха на раз­личных участках кривой выдоха можно делать заключение о месте возникшей обструкции (мелкие или более крупные дыхательные пути). В главе 19 описан ПТ при экзогенном аллергическом альвеолите.

Холодовой ПТ применяют при холодовой крапивнице. На кожу предплечья помещают кусочек льда или бюкс со льдом на 3 мин. При положительном тесте через 5—6 мин после прекращения действия хо­лода развивается волдырная кожная реакция, обычно соответствую­щая очертаниям кусочка льда или бюкса.

Тепловой ПТ применяют при тепловой крапивнице. На кожу пред­плечья помещают бюкс с горячей водой (40—42°С) на 10 мин. Поло­жительная реакция характеризуется образованием волдыря.

Лейкоцитопенический ПТ применяют для этиологической диагно­стики пищевой и иногда лекарственной аллергии. Вначале у больного пищевой аллергией на фоне элиминационной диеты и в условиях покоя натощак дважды на протяжении часа определяют количество лейко­цитов в периферической крови. Затем, если разница между двумя исследованиями не превышает 0,3 • 10у/л, дают принять пищевой про­дукт или лекарство. Через 30, 60 и 90 мин подсчитывают число лейко­цитов. Тест считается положительным при снижении лейкоцитов более чем на 1 • 10у/л. При лекарственной аллергии следует соблюдать осторожность и не ставить тест при наличии анафилактических реакций в анамнезе. Отрицательный тест не исключает сенсибилизации к испы­тываемому аллергену.

Тромбоцитопенический ПТ также применяют для этиологической диагностики пищевой и иногда лекарственной аллергии. Проводят аналогично лейкоцитопеническому ПТ. Считается положительным при снижении числа тромбоцитов на 25% и более.

Экспозиционные ПТ применяют в качестве ориентировочных тестов. Исследуемого, у которого отсутствуют четкие признаки заболевания, помещают в условия, где могут быть предполагаемые аллергены, на­пример, в аптеку, в цех, на конюшню, на мельницу, в места цветения растений и др. При наличии соответствующих аллергенов в окружаю­щей среде развивается обострение заболевания.

Большое значение для выявления сущест­вующей сенсибилизации имеют различные Иммунологи­ческие методы исследования. Преимущество этих методов состоит в их полной безопасности для пациентов.
Все иммунологические методы выявляют только состояние сенсибилизации, т. е. свидетельствуют о том, что у данного индивидуума когда-то уже был контакт с данным антигеном (аллергеном). Они не могут служить показателем или доказательством того, что именно на данный антиген (аллерген) разовьется аллер­гическая реакция, потому что для реализации аллер­гической реакции кроме сенсибилизации нужен еще ряд дополнительных условий.

Так как существует 4 типа сенсибилизации, для диагностических целей необходимо применять несколько методов, позволяющих оценить возможное участие всех четырех типов сенси­билизации.

Для выявления Реагинового типа(I тип)сенсиби­лизации можно применять следующие реакции:

• радиоаллергосорбентный тест (RAST), с помощью которого определяют IgE-антитела к различным видам аллергенов;
• радиоиммуносорбентный тест (RIST), позволяющий определять концентрацию общего IgE. Учитывая, что заболевания реагинового типа сопровождаются увеличением общего IgE, повышенная концентрация этого Ig явится фактором, отчасти подтверждающим участие реагинового механизма, а при отсутствии заболевания —будет служить фактором риска его развития;
• реакция Шульца — Дейла — прямая и пассивная. Прямую реакцию используют обычно в эксперименте. Для этого у сенсибилизированного животного извлекают гладкомышечный орган, помещают в ванночку и налаживают запись его сокращений. Потом в ванночку добавляют аллерген и оценивают интенсивность спазма гладких мышц. Пассивную реакцию можно использовать для выявления реагинов в сыворотке крови больных людей. Для этого в ванночку помещают отрезок подвздошной кишки обезьяны, а затем добавляют сыворотку больного.
  Антитела фиксируются на кишке. Последующее добавление аллергена при наличии соответствующих Ат вызывает сокращение кишки.
• базофильные тесты — прямой и пассивный;
• тест специфического освобождения гистамина;
• тест дегрануляции тучных клеток.

Цитотоксический тип (II тип) сенсибилизации мож­но выявить с помощью:

• различных вариантов метода иммунофлюоресценции;
• теста Кумбса при аутоиммун­ной гемолитической анемии;
• радиоиммунологического метода исследования;
• реакции Штеффена.

Для выявления Иммунокомплексного ти­па (III тип)применяют:

• различные методы определения цир­кулирующих иммунных комплексов в биопсийном материале отложившихся в тканях комплексов и анализ их состава;
• определение  ревматоидного  фактора;
• различные способы определения преципитирующих антител.

Для определения Замедленного типа (IV тип) сен­сибилизации наиболее подходящими являются:

• методы определения лимфокинов, образующихся после контакта с аллергеном. Наиболее распространенными реакциями этого типа являются реакции торможения миграции макрофагов и образования лимфотоксина.
   

Метод Иммуноблотинга.

В настоящее время наиболее широко применяется Метод иммуноблотинга.
Иммуноблотинг (иммуноблот) — высокоспецифичный и высокочувствительный референтный метод выявления антител к отдельным антигенам (аллергенам),  Иммуноблот является  высокоинформативным и достоверным методом. Данный метод исследования не имеет противопоказаний.
 

Aллергодиагностика Immuno CAP.

В последние годы были внедрены новые технологии для более точной тест-диагностики аллергии — Аллергодиагностика Immuno CAP.
Называется «Аллергочип Immuno CAP».

Для тестов ImmunoCAP используются искусственные рекомбинантные аллергены, получаемые методом молекулярного клонирования. С их помощью получается результат такой точности, какой нельзя добиться традиционным методом – определяются не только мажорные компоненты, специфические для данного аллергена, но и минорные. «Аллергочип» позволяет не только точно выяснить основной аллерген, но и вещества, которые могут вызвать перекрестную аллергию.

Этот метод позволяет определить как слабые формы аллергической реакции (дерматит), так и более опасные (астма).
Определение крнцентрации IgE позволяет не только диагностировать данную аллергическую реакцию, но и прогнозировать дальнейшее возможное развитие аллергии. 
Другим важным преимуществом анализов ImmunoCАР является скорость выполнения – четыре дня. Но пока что этот доступен. не для всех лабораторий.